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藍莓黃酮浸提工藝研究

文章來源:惠合膠體磨研磨設備廠 發布日期:2015-10-28 09:30:15作者:admin 點擊次數:
摘 要:目的是為了充分利用藍莓資源,優化藍莓總黃酮的提取條件和探討藍莓總黃酮含量測定技術,采用優化后的乙醇浸提法得到的提取條件為:時間 120min,溫度 60℃,料液比 1∶10,乙醇濃度 40%,得出藍莓總黃酮的提取率為 0.373mg/g,影響藍莓浸提的主要因素依次為料液比、時間、溫度。
藍莓為藍色漿果,具有很高的營養保健價值,富含花青素,有防止腦神經老化、強心、抗癌、軟化血管、提高免疫力等功能。藍莓在貴州適宜栽植,不少地方將其列為優勢產業優先發展,其產業鏈已具相當規模,但藍莓的精深加工產品并不多見。黃酮類化合物具有廣譜的藥理作用,其保健功效顯著,有降低心肌耗氧量, 增加冠狀動脈及腦血管流量、降血糖、抗氧化、消除體內自由基、抗衰老、增強免疫力等功效。而植物中的天然黃酮更以天然、低毒、綠色、可再生等特點備受人們的喜愛,黃酮常見的提取方法主要有微波法、聲法、酶解法、浸提法以及臨界提取法,而生產中常以浸提法為主輔以其它提取技術。 研究藍莓的浸提工藝是為了更好優化浸提法提取藍莓黃酮的技術, 充分利用藍莓植物資源,促進藍莓黃酮資源的開發,探討藍莓中總黃酮的提取、測定方法。

1 材料與方法
1.1 材料與儀器
藍莓;試劑:鹽酸、無水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁(為分析純);蘆丁標準品。電子分析天平、 紫外可見分光光度計、HH-6 恒溫循環水鍋、 旋轉蒸發儀。
1.2 實驗方法
1.2.1 實驗步驟
藍莓→預處理→破碎→溶劑浸泡→過濾→濃縮→定容→測定
試樣制備:將烘干的藍莓粉碎,先后過 10 目和24 目篩,留 24 號篩上層為試樣。
1.2.2 標準曲線的繪制
稱取 0.200g(至 0.0002g)經 120℃減壓干燥至恒重的蘆丁標準品, 置于 1000ml 容量瓶中,用60%的乙醇溶液定容,再分別吸取 0.00mL,1.00mL,2.00mL,3.00mL,4.00mL,5.00mL 至 25mL 容量瓶中,依次各加入 8mL 水、50g/L 的亞硝酸鈉溶液 1.0mL混勻放置 10min, 再加入 100g/L 的硝酸鋁 1.0mL,混勻,放置 10min,后依次加入 200g/L 的氫氧化鈉4.0mL,用水定容,靜置 15min。在 510nm 處測定吸光度,以吸光度為縱坐標,蘆丁質量為橫坐標繪制標準曲線,得出回歸方程。
1.2.3 藍莓中黃酮提取的單因素實驗
1.2.3.1 溫度
分別稱取 1.00g 試樣于 100mL 燒瓶中, 向其中加入 60%乙醇 30mL,搖勻,分別在恒溫水浴鍋中以25℃,40℃,60℃,80℃,100℃加熱 180min, 取出冷卻至常溫,過濾,濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.3.2 時間
分別稱取 1.00g 試樣于 100mL 燒瓶中, 向其中加入 60%乙醇 30mL,搖勻,60℃加熱 30min,60min,120min,180min,210min,取出冷卻至常溫,過濾,濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.3.3 乙醇濃度
分別稱取 1.00g 試樣于 100mL 燒瓶中, 向其中加入乙醇溶液 30mL (乙醇濃度分別為 20%,40%,60%,80%,95%),搖勻,60℃加熱 180min,取出冷卻至常溫,過濾,濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.3.4 料液比
試樣與乙醇溶液按質量體積比 1∶1,1∶2,1∶4,1∶8,1∶10,1∶15,1∶20,1∶30 加入物料, 搖勻,60℃水浴加熱180min,冷卻至常溫,過濾,濃縮定容至 100mL 待測。
1.2.4 測定
從供試品中取 2.00mL 到 25mL 容量瓶中定容,作為樣品空白, 再從供試品中吸取 2.00mL 到 25mL容量瓶中, 加入 8mL 水、50g/L 的亞硝酸鈉溶液1.0mL 混 勻 放 置 10min, 再 加 入 100g/L 的 硝 酸 鋁1.0mL,混勻,放置 10min,后加入 200g/L 的氫氧化鈉 4.0mL,用水定容,靜置 15min,在 510nm 處測定吸光度。測得的樣品吸光度減去樣品空白吸光度,代入蘆丁標準曲線方程可得出溶液中總黃酮的質量。
1.2.5 黃酮提取的正交試驗設計
通過單因素試驗,對溫度、時間、料液比、乙醇濃度四個因素選取三個水平,設計 L9(34)正交試驗。
1.2.6 黃酮含量計算
樣品中總黃酮(以蘆丁計)的含量 X(%),按下式計算:X=m1×100m×2×1000×100
式中:m1———樣品溶液中總黃酮的質量,mg;
m———樣品的質量,g。

2 結果與分析
2.1 標準曲線回歸方程 y=0.7249×C-0.0027。其中 r 為 0.9999,截距為 0.0027,斜率為 0.7249。
2.2 單因素實驗分析
2.2.1 提取溫度的選擇
分別在 25℃,40℃,60℃,80℃,100℃下加熱浸提藍莓試樣,過濾,定容,提取液在 510nm 下測定吸光度。在其他條件相同時,隨著溫度的提高,總黃酮質量增大,溫度到達 60℃時,質量接近值,溫度進一步增高,總黃酮質量減小。
2.2.2 提取時間的選擇
取 1g 試樣分別在溶劑中浸提 30min,60min,120min,180min 及 210min, 測 定 提 取 液 在 波 長 為510nm 下的吸光度值。隨著浸提時間的延長,總黃酮質量在不斷升高,直到時間為 60min時,總黃酮質量接近水平,然后逐漸下降。
2.2.3 提取溶劑酒精濃度的選擇
酒精濃度分別為 20%,40%,60%,80%,95%浸提試樣, 測定提取液在波長為 510nm 下的吸光度值。其他條件相同時,隨著酒精濃度的升高,總黃酮質量呈上升趨勢,到乙醇濃度為 60%時,總黃酮質量接近值, 而后隨乙醇濃度的上升, 總黃酮質量下降。
2.2.4 料液比的選擇
分別采用料液比為 1∶1,1∶2,1∶4,1∶8,1∶10,1∶15,1∶20,1∶30 的條件下來提取黃酮,測定提取液在波長510nm 時的吸光值, 換算成總黃酮質量, 如圖 4 所示。隨著料液比的增大,總黃酮提取率逐漸下降,當料液比過 1∶8,下降明顯。
2.3 藍莓黃酮提取的正交試驗分析
通過單因素試驗,對時間、溫度、料液比、乙醇濃度 4 個因素選取三個水平,設計 L9(34)正交試驗,進行組合優選。
時間 120min,溫度 60℃,料液比 1∶10,乙醇濃度 40%。在正交試驗的四個因子中,由 R 值的大小分析我們可以看出, 影響提取率的因素依次為:料液比>時間>溫度,結合 K 值,R 值的分析可得出理論優提取條件也為:時間 120min,溫度 60℃,物料比 1∶10,乙醇濃度 40%,在理論優條件下藍莓總黃酮的提取率為 0.373mg/g。所以藍莓黃酮的提取條件為時間 120min,溫度 60℃,料液比 1∶10,乙醇濃度 40%。正交試驗的 Std.Dev 為 0.069,F 值小于 0.001,說明實驗數據的聚合度較好,實驗平行性好,度高,實驗過程中的系統誤差小。

來源:惠合膠體磨研磨設備廠
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